Голландын судлаачид CRISPR болон биолюминесценцийг хослуулан туршилтын туршилт хийжээХалдварт өвчин

Шинээр боловсруулсан шөнийн уураг нь вируст өвчний оношийг хурдасгаж, хялбаршуулж чадна гэж Нидерландын судлаачид үзэж байна.
Лхагва гарагт ACS Publications сэтгүүлд нийтлэгдсэн тэдний судалгаа нь гялалзсан цэнхэр эсвэл ногоон уураг ашиглан вирусын нуклейн хүчлүүд болон тэдгээрийн гадаад төрхийг хурдан шинжлэх эмзэг, нэг үе шаттай аргыг тайлбарлав.
Нуклейн хүчлийн хурууны хээг илрүүлэх замаар эмгэг төрүүлэгчдийг тодорхойлох нь эмнэлзүйн оношлогоо, биоанагаах ухааны судалгаа, хүнсний болон байгаль орчны аюулгүй байдлын мониторингийн гол стратеги юм.Өргөн хэрэглэгддэг тоон полимеразын гинжин урвал (ПГУ) нь маш мэдрэмтгий боловч нарийн дээж бэлтгэх эсвэл үр дүнг тайлбарлах шаардлагатай байдаг тул зарим эрүүл мэндийн байгууллагууд эсвэл нөөцийн хязгаарлагдмал орчинд ашиглах боломжгүй болгодог.
Нидерландаас ирсэн энэ бүлэг нь янз бүрийн нөхцөлд хэрэглэж болох хурдан, зөөврийн, хэрэглэхэд хялбар нуклейн хүчлийн оношилгооны аргыг боловсруулахын тулд их сургууль, эмнэлгийн эрдэмтдийн хамтын ажиллагааны үр дүн юм.
Тэд галын анивчдаг, галт зэвсгийн гялбаа, усны фитопланктоны өчүүхэн одноос санаа авсан бөгөөд бүгд биолюминесценц гэж нэрлэгддэг үзэгдлээр тэжээгддэг.Энэхүү харанхуйд гэрэлтэх нөлөө нь люцифераза уурагтай химийн урвалын үр дүнд үүсдэг.Эрдэмтэд люциферазын уургуудийг мэдрэгчүүдэд нэгтгэсэн бөгөөд тэдгээр нь байг олох үед ажиглалтыг хөнгөвчлөх зорилгоор гэрэл ялгаруулдаг.Энэ нь эдгээр мэдрэгчийг тусламж үйлчилгээний цэгийг илрүүлэхэд хамгийн тохиромжтой болгодог ч одоогоор эмнэлзүйн оношлогооны шинжилгээнд шаардлагатай өндөр мэдрэмжгүй байна.CRISPR генийн засварлах арга нь энэ боломжийг хангаж чадах ч нарийн төвөгтэй, дуу чимээ ихтэй дээжинд байж болох сул дохиог илрүүлэхийн тулд олон алхам, нэмэлт тусгай тоног төхөөрөмж шаарддаг.
Судлаачид CRISPR-тай холбоотой уургийг энгийн дижитал камераар илрүүлэх боломжтой биолюминесцент дохиотой хослуулах аргыг олсон байна.Шинжилгээ хийхэд хангалттай РНХ эсвэл ДНХ-ийн дээж байгаа эсэхийг шалгахын тулд судлаачид 100°F-ийн тогтмол температурт ажилладаг рекомбиназа полимеразын олшруулалтыг (RPA) хийсэн.Тэд Luminescent Nucleic Acid Sensor (LUNAS) хэмээх шинэ платформыг бүтээсэн бөгөөд үүнд хоёр CRISPR/Cas9 уураг нь вирусын геномын өөр өөр зэргэлдээ хэсгүүдэд зориулагдсан бөгөөд тус бүрдээ люциферазын өвөрмөц фрагмент хавсаргасан байдаг.
Судлаачдын судалж буй вирусын өвөрмөц геном байгаа үед CRISPR/Cas9 хоёр уураг нь зорилтот нуклейн хүчлийн дараалалд холбогддог;Тэд ойртож, химийн субстрат байгаа нөхцөлд люциферазын бүрэн бүтэн уураг үүсч, хөх гэрэл цацруулах боломжийг олгодог..Энэ процесст хэрэглэсэн субстратыг тооцохын тулд судлаачид ногоон гэрлийг ялгаруулдаг хяналтын урвалыг ашигласан.Өнгө нь ногооноос цэнхэр болж өөрчлөгддөг хоолой нь эерэг үр дүнг харуулж байна.
Судлаачид өөрсдийн платформыг илрүүлдэг RPA-LUNAS шинжилгээг боловсруулж туршиж үзсэнSARS-CoV-2 РНХуйтгартай РНХ тусгаарлалтгүй бөгөөд хамрын хөндийн арчдас дээж дээр оношилгооны үр дүнг харуулсан.КОВИД 19өвчтөнүүд.RPA-LUNAS нь SARS-CoV-2-ыг 200 хувь/мкл хүртэлх РНХ вирусын ачаалалтай дээжинд 20 минутын дотор амжилттай илрүүлсэн.
Судлаачид тэдний шинжилгээ нь бусад олон вирусыг хялбар бөгөөд үр дүнтэй илрүүлж чадна гэж үзэж байна.Тэд "RPA-LUNAS нь халдварт өвчний оношилгооны цэгүүдэд сонирхолтой байдаг" гэж тэд бичжээ.